使用黄曲每毒素总量免疫亲和柱的操作流程是什么
黄曲每毒素总量免疫亲和柱主要用于食品样品中黄曲零毒素的提取、纯化和浓缩。该液通过免疫亲和柱使黄曲电毒素亲和性吸附在免疫亲和柱上,再与洗脱液甲醇洗脱亲和性,使黄曲每素从亲和柱分离进入洗脱液甲醇。
经提取、纯化、浓缩后,用HPLC或ELISA法测定样品中黄曲每毒素的总量。免疫亲和柱是次要的,必须注意不能重复使用。本品是基于免疫竞争法原理,快速、准确地提取纯化样品中黄曲每总量的方法。它具有简单、快速、无需特殊仪器等优点。
黄曲每毒素总量免疫亲和柱的操作方法如下:
一:样品处理:参照食品安全标准食品中黄曲每毒素B族和G族的测定中各法,对样品进行处理。
二:净化:以食品安全标准食品中黄曲每毒素B族和G族的测定、为例说明
1、柱子预处理:取下黄曲每毒素总免疫亲和柱总量,恢复室温22-25度,取下上塞,打开下端塞,将柱内储存液排至凝胶界面以上3-5mm,停止流体流动或直接将免疫层析柱与20ml注射器连接。
2、加样:依次加入处理过的样品溶液,使其通过色谱柱,打开下端塞,调节流速,支撑1-2滴/秒,排出。注:大米、玉米、小麦、花生及其制品、植物油:加15ml加工样品酱油、醋:加10ml加工样品
3、大米、玉米、小麦、花生及其制品、植物油样品的清洗:待液体*排出后,用10ml蒸馏水冲洗两次,并丢弃废水。酱油、食醋样品的漂洗:待液体*排干后,用10毫升0.1%吐温-20 PBS溶液漂洗并丢弃废水;用10毫升蒸馏水漂洗两次并丢弃废水。
4、吹干:利用真空设备如吸耳球、注射器等,压入空气,将柱子中的水吹干。
5、洗脱:加入甲醇1ml至色谱水平,调节流速至2-3s/滴,缓慢洗脱,收集所有洗脱液作为纯化样品。
三:检测
净化后样品可直接用ELISA,荧光和高效液相等方法进行检测。
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