微囊藻毒素的测定方法

　　下面来讲述微囊藻毒素的2种测定方法：
 

　　藻细胞破裂后会释放出多种藻毒素。一般认为它是由肽合成酶复合体合成的生物活性小肽，具有环状结构及其氨基酸的特殊结构。影响微囊藻毒素合成的环境因子较多，主要的有光照、温度、pH值和营养元素等。有研究结果表明藻毒素是初级代谢产物，其主要作用是通过鳌合使进入藻体内的重金属离子减轻毒性和抑制其它水生植物并促进其本身的生长。不同藻毒素的功能还有待深入研究。
 

　　1.生物毒理检测法:生物毒理检测法包括动物毒性法、细胞毒性法。动物毒性法是将纯化的微囊藻毒素或水华蓝藻中提取的藻毒素通过动物口服或注射来间接评价藻毒素的毒性的一t种方法。根据动物的生理病变及半致死剂量(LD50)可初步确定藻毒素的毒性，这也是毒理评价的常用方法。除个别异构体的LD50为200~250μg/kg外，多数微囊藻毒素LD50为60~70μgkg。动物毒理检测法操作简单，但个体差别较大，并不能准确的判定藻毒素类型及结构。因此动物毒理检测法通常只作为毒性检测的初筛选方法.另外还有利用毒素对细胞的毒性作用来检测的方法是细胞毒性检测技术。这种技术既可以对毒素定性分析还可以定量。谷康定等用2步灌流法制备大鼠原代肝细胞，经MC-LR处理后，数小时后细胞形态学即发生改变，其灵敏度可达μg/L级。但该技术操作繁琐，基本上处于初步研究阶段，目前较难大范围推广应用。
 

　　2.化学分析法:高效液相色谱是目前应用广泛的方法，具有较高的灵敏度和精密度，依据保留时间定性，一次可以测定多种藻毒素。高效液相色谱可以分离纯化、定性或定量检测微囊藻毒素。一般是先将样品通过固相萃取吸附富集，溶剂淋洗后洗脱，用于定性、定量分析。另外可采用色质联用或与核磁共振联用技术确定藻毒素的分子式和结构。对于流动相，一般采用乙腈/水或甲醇/水体系的不同浓度梯度淋洗，在水相中加入一定比例的三fu乙酸或采用酸性的磷酸盐缓冲溶液以保持酸性(pH 约2.5)，用C18固相萃取柱.对藻毒素进行分离。藻毒素的种类繁多，很多情况下需要测定水体中总藻毒素的浓度。藻毒素均含有侧链ADDA基团，而藻毒素的毒性与侧链ADDA基团密切相关，ADDA基团的大吸收峰在238nm处，所以对MC的化学检测，常采用HPLC/UV法。