分享一下健忘性贝类毒素的检测方法

　　健忘性贝类毒素（AmnesicShellfish Poisoning，ASP）是由一种海洋硅藻——拟菱形藻Pseudo-nitzschiasp.产生的强神经性生物毒素，化学名称为多莫酸（domoic acid，简称DA）。一种兴奋性脯氨酸衍生物和神经毒素，是浮游植物代谢的产物，可以在被藻类污染的海洋食物特别是贝类中检测到，其结构与红藻氨酸和谷氨酸相似，是红藻氨酸受体的兴奋剂。

 

　　检测方法

 

　　研究人员已经开发出了多种健忘性贝毒检测方法，包括小鼠生物检测、HPLLC-MS、荧光HPLC、GC-MS、TLC（薄层色谱）、氨基酸分析、CE（毛细管电泳）、CEC（Capillary electrochromatography）、ELISA、受体结合实验（Receptorbinding assay）等，其中荧光HPLC和受体结合实验的灵敏度（limits of detection，LOD）能达到0.001-0.002 μg ml-1，而ELISA方法的检测下限（LOD）对贝肉样品是3.3μgkg-1，对海水样品是6.8 ngL-1；小鼠生物检测由于时间较长，又不够灵敏（只适合检测40-100μg g-1以上浓度的DA），已经不适用于20μg g-1的DA*了。欧盟的DA检测方法是高效液相色谱（HPLC）法，而ELISA法及其试剂盒（ASP Direct cELISAtest kits，BiosenseLaboratories，Norway）也因具有方便、快速、灵敏等特点，于2006年被分析化学家协会（AOAC）核准为检测方法。

 

　　高效液相色谱（HPLC）法的运用HPLC方法是AOAC（1991）*使用的DA检测方法，也是欧美各国自1987年ASP事件后所采用的DA检测方法。HPLC-UVD（高效液相色谱-紫外探测）法的检测下限是10-80 ng ml-1，需要使用酸性流动相来抑制羟基离子化反应。由于DA具有一个强大的紫外色素团，所以利用简单的无梯度HPLC和紫外探测就可以检出；因此，ASP也是所有海洋生物毒素中容易检测的。

 

　　LC/MS（液相色谱/质谱联用）法利用甲醇水溶液抽提组织匀浆，用乙腈水溶液稀释后，再用C18固相萃取，并采用离子喷射界面。LC/MS或LC/MS/MS检测法相当可靠，检测下限与HPLC-UV 近似。Dahlmann et al.使用一种改进的LC-ESI-MS（电子喷射电离液质联用法）可以一次性同时检测包括DA在内的7种生物毒素。